ตามล่าหาจอกศักดิ์สิทธิ์ที่ซ่อนมานานหลายศตวรรษ อินเดียน่า โจนส์ต้องร่วมมือกับเฮนรี่ โจนส์ซีเนียร์ ผู้เป็นพ่อที่ห่างเหินกันมานาน หลังพ่อของเขาถูกพวกนาซีลักพาตัวไปเพื่อบังคับให้เปิดทางไปสู่จอกศักดิ์สิทธิ์ การผจญภัยครั้งนี้พาพวกเขาผ่านปริศนายุคกลางและกับดักมรณะในทะเลทราย ก่อนจะเผชิญหน้ากับศัตรูที่ต้องการพลังอมตะจากจอกศักดิ์สิทธิ์
